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专利号:200810064829
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一种表达木糖还原酶基因的质粒的构建方法

一种表达木糖还原酶基因的质粒的构建方法,它涉及一种质粒载体的构建方法。它解决了酿酒酵母中缺少木糖还原酶,不具备木糖代谢能力,不能有效发酵植物纤维水解液的问题。构建方法:先克隆XYL1基因、ADHt基因序列和KanR基因;再回收、纯化步骤一至三制备的基因片段,分别与载体连接;然后构建质粒pADH、质粒pAK;再将XYL1基因引入质粒pAK,即得到表达木糖还原酶基因的质粒。本发明方法将木糖还原酶基因XYL1和乙醇脱氢酶的强启动子的终止子序列构建于同一个质粒载体上,在增添了木糖代谢为乙醇的途径外,还抑制了木糖代谢为木糖醇,能够介导酿酒酵母高效代谢木糖生产乙醇。

一种表达木糖还原酶基因的质粒的构建方法

一种表达木糖还原酶基因的质粒的构建方法,其特征在于表达木糖还原酶基因的质粒的构建方法按以下步骤进行:一、克隆休哈塔假丝酵母菌的XYL1基因;二、克隆质粒pKT0150中的ADHt基因序列;三、克隆质粒pKT0150中的KanR基因;四、回收、纯化步骤一至三制备的基因片段,然后在分别与pGEMT  Easy载体在16℃的条件下连接10~12h,得到pGMT-XYL1、pGMT-ADHt和pGMT-KanR;五、构建质粒pADH,以酿酒酵母整合质粒p406ADH1为骨架引入ADHt基因;六、构建质粒pAK,将KanR基因引入质粒pADH中;七、将XYL1基因引入质粒pAK,即得到表达木糖还原酶基因的质粒;其中步骤一中扩增上游引物序列为5’-ACTTCTAGATACATCCACAATGAGCCC-3’,下游引物序列为5’-TTCGGATCCTCTACGCAAAGAAAGCAG-3’;步骤二中扩增上游引物序列为5’-CGCCTCGAGTTTGTTACTGCTGCTGGT-3’,下游引物序列为5’-CTTGGTACCCAAGACTGTCAAGGAGGG-3’;步骤三中扩增上游引物序列为5’-TTCGACGTCTCTGTTTAGCTTGCCTC-3’,下游引物序列为5’-GCGGACGTCTATCATCGATGAATTCGA-3’。
 


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专利号: 200810064829
申请日: 2008年6月30日
公开/公告日: 2008年11月12日
授权公告日:
申请人/专利权人: 黑龙江大学
国家/省市: 哈尔滨(93)
邮编: 150080
发明/设计人: 平文祥、葛菁萍、凌宏志、杜春梅、宋刚、赵丹、高冬妮、于新
代理人: 单军
专利代理机构: 黑龙江省松花江专利事务所(23109)
专利代理机构地址: 黑龙江省哈尔滨市南岗区西大直街26号四楼(150001)
专利类型: 发明
公开号: 101302533
公告日:
授权日:
公告号: 000000000
优先权:
审批历史:
附图数: 0
页数: 9
权利要求项数: 2
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